遠慕課堂：細胞傳代方法您做對了嗎？
點擊次數：874 更新時間：2019-08-16
通過自主研發和兼并重組不斷擴展企業產品線，逐步發展為試劑的專業制造商和電子商務集成供應商，成為試劑行業發展的者。開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。
細胞與試劑方面：
1、細胞(單層細胞，鏡檢適合)
2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等適合細胞有要求的培養液)
3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬單位）
4、7.5％NaHC03 溶液
5、0.25％胰蛋白酶
6、 PBS 洗液。
實驗小用具方面：
1、小方瓶(100m1)
2、克氏瓶
3、膠塞
4、吸管(10ml、1m1）
5、細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)
6、C02 孵箱
7、超凈臺
8、倒置顯微鏡
9、4℃、- 20℃冰箱
細胞傳代的操作步驟
1、挑選細胞：鏡檢細胞，挑選生長狀態良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態好無污染、無異常及可疑病變細胞。
2、配制細胞培養液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養液100ml 內，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。
3、消化細胞：先用PBS 洗液沖洗細胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶內加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液*覆蓋細胞表面。
4、至細胞*脫落到胰酶中：每瓶加入10m1 細胞培養液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養量。
5、加塞，置于37±1℃孵箱培養。約2～4 天成片(由細胞接種濃度決定)。
6、填寫傳代記錄。
