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    傷口愈合/細胞劃痕實驗方法分享 遠慕新聞√
    點擊次數:951 更新時間:2020-04-23

    細胞劃痕實驗(Wound Healing)是一種操作簡單,經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是,當細胞長到融合成單層狀態時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。基本的步驟包括“劃痕”的制造,細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。

    特點:

    1. 在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程。

    2. 非常適合研究細胞與胞外基質(ECM),細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。

    3. 與包括活細胞成像在內的顯微鏡系統兼容,可用于分析細胞間的相互作用

    4. 研究細胞遷移的體外實驗中zui簡單的方法。




    傳統實驗方法實驗步驟:

    1. 培養板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一 個視野)。

    2. 細胞消化后接入12孔板,數量以貼壁后鋪滿板底為宜(數量少時可培養一段時間至鋪滿板底)。

    3. 細胞鋪滿板底后,用1 ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結果,這也是該方法zui大的缺陷。)

    4. 吸去細胞培養液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產生的細胞碎片。

    5. 加入無血清培養基,拍照記錄。

    6. 將培養板放入培養箱培養,每隔4-6小時取出拍照。

    7. 根據收集圖片數據分析實驗結果。

    Culture Insert方法

    1. 準備細胞,培養液,culture Insert。

    2. 如圖,將細胞接種于Dish中間的Insert,細胞長滿Insert 區域后用鑷子移除Insert即可產生500 μm寬度的劃痕。

    3. 每隔4-6小時拍照記錄。

    4. 根據收集圖片數據分析實驗結果。

    總結:相比較于傳統的劃痕實驗,Ibidi的設計geng科學、重現性geng好

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