如果一抗上直接加標(biāo)記，不但不能保證抗體抗原反映的特異性，也不能保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。
首先，由于抗體都是人工去設(shè)計(jì)的，對(duì)于一個(gè)人工設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，你可以設(shè)計(jì)一個(gè)很好的抗體與他結(jié)合；然而對(duì)于天然蛋白質(zhì)，你不能保證一個(gè)很高的識(shí)別率和準(zhǔn)確度。所以，針對(duì)1抗，我們可以設(shè)計(jì)出完美的2抗，然而針對(duì)原蛋白質(zhì)，你無(wú)法設(shè)計(jì)一個(gè)特別完美的1抗。所以，直接標(biāo)記1抗的出來(lái)的結(jié)果是不準(zhǔn)確的，而標(biāo)記2抗是相對(duì)于1抗直接標(biāo)記來(lái)說(shuō)更準(zhǔn)確的，所以經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)之后人們拋棄了直接標(biāo)1抗的方法。當(dāng)然，標(biāo)2抗也不是*完美的，當(dāng)然你也可以標(biāo)3抗，4抗，不過(guò)那個(gè)成本就指數(shù)上升了，在保證一定的置信度的情況下，人們一般標(biāo)到2抗就夠了。
其次，對(duì)于同一個(gè)抗原，不同來(lái)源的1抗所識(shí)別的位置可能會(huì)有很大差異。這樣，你就無(wú)法保證試驗(yàn)的可重復(fù)性。而1抗作為抗原來(lái)講，可以將它的抗原決定簇設(shè)計(jì)的一樣，這樣針對(duì)不同的1抗，2抗是可以保證差不多一個(gè)樣子的。而且這也給節(jié)約成本和方便標(biāo)記帶來(lái)了方便。
所以一般現(xiàn)在都是2步標(biāo)記，第1個(gè)原因是主要的，第二個(gè)原因是次要的。
