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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    PC12細胞培養實驗步驟
    點擊次數:1045 更新時間:2020-07-31

    PC12細胞是大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株,具神經內分泌細胞的一般特征,因其具可傳代特點,廣泛應用于神經生理和神經藥理學研究。

     

     

    1. PC12細胞有兩種:未分化型和分化型。其中未分化型的PC12細胞貼壁能力強,傳代時需要胰酶消化,形狀不規則。分化型PC12細胞傳代時不需要胰酶,直接可以吹下來,形狀規則。這兩種細胞沒有很大的區別,但我在實驗中發現,未分化型的PC12細胞對藥物的敏感性較之分化型的要差一些。

    2. 由于PC12細胞是一種腫瘤細胞,在傳代次數較多后,它的形狀和性狀會發生改變。這些改變尤見于未分化型PC12細胞。主要是細胞形狀變得geng加不規則,對藥物的敏感性愈加下降。因此,建議長期用PC12細胞作實驗的戰友-好嚴格控制細胞的傳代次數。

    3.在復蘇細胞時動作一定要迅速,放入溫水中1~2min后要馬上加入培養液中,培養12~24小時后geng換一次培養液,這樣不僅可以把DMSO吸掉,而且可以將死亡的細胞也吸掉。細胞一天一看即可,經常動會有影響。注意過濾后血清的PH值,因為培養液過濾后PH值會有所改變。復蘇后的換液時間取決于您復蘇時是否洗滌離心細胞,去除了凍存液中的DMSO,如果沒有去除DMSO,細胞培養過夜后就要*換液;如果復蘇時洗滌離心過,可以待傳代時再換液也可。(據我個人經驗,還是復蘇時去除DMSO,細胞的生長狀態好一些)

    4. 狀態良好的細胞復蘇后 4 h即可貼壁,開始增殖,大約2 d即可傳代,接種48h應該到了對數增長期。

    5. 每天觀察一兩次細胞我不認為會對細胞的生長造成不良影響,不過每次觀察的時間不易過長。

    6. 傳代時我認為-好不要用胰蛋白酶,因為胰蛋白酶對細胞有破壞作用。我以前用胰蛋白酶消化傳代過PC12, 結果傳代后的細胞雖然貼壁,形態也好,但就是增殖緩慢,所以我現在都是用槍吸取培養液直接吹打,傳代后細胞增殖迅速,2 d就長滿了(因為長的太快,我只好降低血清濃度,用5%FBS)

    7. 傳代的時機-好選在細胞生長旺盛,占瓶底70%-80%時-好,如果細胞長的太滿,細胞的狀態會越來越差,zui后大片死亡;這種細胞傳代后生長也不好;而且長的太滿后,細胞貼壁牢,難于吹起來,相反,70%-80%時細胞很容易吹起來。

    8. 如果細胞貼壁太緊,不得不用胰蛋白酶消化,注意低濃度,段時間,多洗滌。我一般用0.025%的胰蛋白酶,在鏡下觀察細胞突起收縮,有零星的細胞漂起就中止,或用肉眼觀察,瓶底呈現薄霧狀的模糊感時就中止,中止一定要*,要用含血清的培養液多洗滌離心幾次,確保去除剩余的胰蛋白酶,否則傳代后的細胞難以生長。

    9. 就培養器皿的選用,我推薦在60mm的培養皿中培養傳代,第1,在皿里細胞生長的geng快,我想可能是皿比瓶的氣體交換geng好吧;第二,傳代時吹打geng方便,不易污染。

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