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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    全血細胞培養(yǎng)染色體技術常用試劑配制
    點擊次數(shù):791 更新時間:2020-08-14

        一、國內實驗室應用試劑配制

        (一)培養(yǎng)液

        (1)RPMI1640培養(yǎng)液:稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g,碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml,加雙蒸水至1000ml,調節(jié) pH7.2~7.4無菌過濾凍存?zhèn)溆谩?/p>

        (2)小牛血清商品

        (3)植物凝集素(PHA)

        (4)pH調整液:5% NaHCO3溶液高壓滅菌(8磅15min),0.1N稀鹽酸液100ml。

        (5)秋水仙素:10mg/ml無菌過濾高壓滅菌(8磅10min)。

        (6)磷酸緩沖液:pH7.4。

        磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸2氫鉀2.67g(無水),溶于1000ml雙蒸水中,加肝素,終濃度為100u/ml。

        (7)Giemsa染色液:

        Giemsa粉劑 1g

        甘油 66ml

        在研缽中,加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨,60℃溫箱中保溫2h,冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍,隨配隨用。

        (二)固定液

        (1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。

        (2)PBS緩沖液配制:

        NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g

        KCl 0.4g KH2PO4 0.4g

        加雙蒸水至1000ml pH7.0。

        取5%胰酶(生理鹽水配制)1ml加入50ml PBS液中(終濃度為0.025%),4℃冰箱待用。

        二、細胞培養(yǎng)(Bhatl B和McGee JOD,1990)

        1.*培養(yǎng)基

        RPMI 76.0ml

        胎牛血清 20.0ml

        植物凝集素 2.0ml

        抗生素/抗菌素溶液(100

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