細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)緩慢？遠(yuǎn)慕幫您解決！
點(diǎn)擊次數(shù)：774 更新時(shí)間：2021-12-06
細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的常見原因:
(1)培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長(zhǎng)所需的某種因子。
通常情況下，當(dāng)小伙伴購(gòu)買細(xì)胞，并沒(méi)有按照ATCC或國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購(gòu)買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。(B)細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無(wú)菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培養(yǎng)物，建議培養(yǎng)箱*消毒。
如果不冷凍，而且這種細(xì)胞非常珍貴，常用的治療方法是藥物治療:細(xì)菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌藥物;支原體污染再加上抗支原體藥物，具體藥物可以咨詢技術(shù)支持，他們會(huì)更加專業(yè)。
(C)許多細(xì)胞的生長(zhǎng)依賴于密度。如果傳代后細(xì)胞密度過(guò)小，也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。這段時(shí)間沒(méi)有什么特別好的，就是更換液體。如果細(xì)胞培養(yǎng)瓶為T75，則可以消化、離心、復(fù)蘇，然后接種到T25瓶中。
(4)冷凍細(xì)胞中添加DMSO(二甲基亞砜)的量不正確，沒(méi)有逐漸梯度冷卻。下一次恢復(fù)后的細(xì)胞總是壞的。處理方法:按推薦的冷凍保存方法制備冷凍液。部分細(xì)胞適合10% DMSO，部分細(xì)胞適合5% DMSO;嚴(yán)格遵循漸變冷卻的原則，細(xì)胞恢復(fù)后迅速解凍。
(5)換液間隔時(shí)間太長(zhǎng)。一些小伙伴真的把細(xì)胞“佛”系生長(zhǎng)。當(dāng)他們想到它的時(shí)候，才會(huì)換下液體，相信一個(gè)句子。“你已經(jīng)是一個(gè)成熟的細(xì)胞了。你應(yīng)該學(xué)會(huì)養(yǎng)活自己，成長(zhǎng)”。在這種情況下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中積累了大量的細(xì)胞代謝廢物，影響細(xì)胞活性。
(6)細(xì)胞的“消化”時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，減少對(duì)細(xì)胞的損傷;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合鈣離子，影響細(xì)胞粘附。治療方法:控制細(xì)胞“消化”時(shí)間，盡量去除干凈的胰蛋白酶和EDTA。
PH值:細(xì)胞需要在一定的PH值下生長(zhǎng)，這個(gè)小朋友知道。但是很多時(shí)候PH值是我們忽略的東西，這也是想強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)。隨著使用時(shí)間的增加，我們使用的介質(zhì)可能會(huì)慢慢變成堿性!(當(dāng)然，它也可能變酸，但改變堿是常見的)。一般來(lái)說(shuō)，過(guò)堿的培養(yǎng)基會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。治療:簡(jiǎn)單的方法就是更換新鮮的培養(yǎng)基!當(dāng)然，如果你有時(shí)間和條件，你可以調(diào)整介質(zhì)的pH值。
