更換培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)注意的問(wèn)題
點(diǎn)擊次數(shù)：844 更新時(shí)間：2022-02-16
能否使用細(xì)胞說(shuō)明書(shū)上不同的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞？產(chǎn)品目錄或者細(xì)胞說(shuō)明書(shū)上的推薦的培養(yǎng)基一般是細(xì)胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基或者已經(jīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的對(duì)該細(xì)胞株最合適的培養(yǎng)基，細(xì)胞對(duì)未推薦的培養(yǎng)基也許會(huì)適應(yīng)，也有可能不適應(yīng)。對(duì)于更換培養(yǎng)基，應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待，更換培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)留一瓶細(xì)胞使用推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng)，留作種子。
更換培養(yǎng)基有兩種方法，最jian單的方法是直接更換培養(yǎng)基，強(qiáng)制使細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基；還有一種更溫和的方法：傳代細(xì)胞的時(shí)候分成細(xì)胞兩瓶，第一瓶使用原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，第二瓶使用50%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，50%新的培養(yǎng)基，之后仔細(xì)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，如果第二瓶細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，應(yīng)立即停止更換培養(yǎng)基，如果第二瓶生長(zhǎng)狀態(tài)好，可以繼續(xù)傳代分瓶，一瓶使用50%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，50%新的培養(yǎng)基，另一瓶使用25%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，75%新的培養(yǎng)基，繼續(xù)觀察，如果細(xì)胞狀態(tài)好，可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)需要遵循的三大原則
一、 配制培原則
目的要明確，根據(jù)不同的微生物的營(yíng)養(yǎng)要求配制針對(duì)強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成自身需要的糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物，因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基*可以由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。
二、操作要規(guī)范
細(xì)菌培養(yǎng)，要掌握溫度、濕度、時(shí)間、環(huán)境等因素，微生物限度檢驗(yàn)細(xì)菌培養(yǎng)溫度為30~35℃，此溫度適于中溫菌生長(zhǎng)，某些高溫菌在該溫度下也可以生長(zhǎng)。藥品污染的控制菌多是中溫菌。根據(jù)不同菌株及檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同的培養(yǎng)時(shí)間。根據(jù)細(xì)菌對(duì)環(huán)境要求不同常用培養(yǎng)方法如下
1.需氧培養(yǎng)法：此為最chang用的培養(yǎng)方法，適于需氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。
2.厭氧培養(yǎng)法：厭氧菌的培養(yǎng)，必須在無(wú)氧的環(huán)境中進(jìn)。
3.需氧培養(yǎng)法：有些細(xì)菌為微需氧菌在微需氧環(huán)境(5%02、10%CO2、85%N2)生長(zhǎng)良好，微需氧培養(yǎng)法常用的有混合氣體法、氣袋法、雙平板法、燭缸法這幾種。
三、講究經(jīng)濟(jì)節(jié)約
在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用價(jià)廉且易于獲得的原料為培養(yǎng)基成分，特別在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。如在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)中，常常用利用糖蜜、豆制品工業(yè)廢液等作為培養(yǎng)基的原料，另外大量的農(nóng)副產(chǎn)呂如麩皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。
培養(yǎng)基在使用過(guò)程中應(yīng)注意的問(wèn)題
(1)培養(yǎng)基在使用前需37 oC預(yù)熱或在室溫平衡后再使用。
(2)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，吸取過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)基焦化，將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液中。
(3)盡量縮短各種液體、細(xì)胞的暴露時(shí)間。
(4)避免液體間、細(xì)胞間的交叉污染。
(5)配制*培養(yǎng)基時(shí)，配制的量最好在2周內(nèi)用完為好。
