內標物和替代物相信大家都用過，你在意過它們的區別嗎？它們兩者都有校正的作用，使實驗結果更準確，那什么時候該用什么呢？遠慕生物為小伙伴們解答！
內標物和替代物定義：
內標物--是加到樣品、提取物或標準溶液中已知量的純物質，是用來測定同一溶液中其它分析物質和替代物的相對響應值。內標物質必須是分析的樣品組分中所不含有的，一般是目標物的氘代物，用來體現目標物的基底效應。
替代物--是一種在任何樣品中都不可能被發現的純物質，其在樣品提取和進行其它處理前被加入的等分和量是已知的。它同樣品中其它組分一樣被測定，它的作用是監控每個樣品的方法性能。
它是一種與目標物性質相近的物質，一般在前處理之前加，用來表征整個前處理過程的損失或回收率。只是用來監測萃取效率，一般認為其回收率在某一范圍（不同標準要求不同）內即認為萃取結果可以定量作為檢查結果。
異同點
首先都要在標準溶液中加入替代加標物和內標，兩者最主要的區別在于加入的時間點，萃取前加入，通過最后萃取液的定量，可以確定整個過程的萃取效率及損失，而進樣前加入可以修正進樣誤差，替代加標物如在標液中選擇為內標，就可以修正全過程誤差，如果視為外標，主要是監控回收效率。
內標法在具體做的時候其實包括兩部分吧，一個是內標標準曲線的繪制；一個是樣品前處理。在繪制內標法標準曲線時，縱、橫坐標中，一個是濃度，一個比值（待分析物與內標物峰面積之比，內標物的濃度是固定的），待分析物的濃度是通過把比值（待分析物與內標物的比值）代入內標標準曲線求出的，樣品處理雖然會使內標物有所損失，但是由于待分析物與內標物濃度是同方向變化的，并不影響定量結果，這也是內標法的一個優勢所在。
環境樣品應用舉例
1.替代物的作用
替代物監控樣品預處理過程中標物的損失或玷污，樣品中不應含替代物，替代物也不應是目標物，但應是和目標物的物理化學性質相似的化合物，且能夠被定量測定。替代物在樣品預處理前定量加入樣品中，隨樣品走完預處理和儀器分析的全過程。
由于替代物不斷存在于樣品中，可以認為替代物的損失或者玷污的程度，即回收率，能夠準確測量。又由于替代物和目標物的物理化學性質相似，在預處理過程中兩者的損失或玷污的程度是一致的。因此，未知目標物在預處理過程中的回收率，可由已知的替代物的回收率來衡量。這就是替代物在環境樣品的分析中的作用。
鑒于對替代物的要求，樣品的替代物通常是目標物的同位素化合物。例如，測定多環芳烴時，可選用萘、二氫苊、菲、屈等的氘代化合物。它們的物理化學性質與待測的目標物極其相似，萃取過程中的損失或玷污是一致的。經過氣相色譜柱的分離后，氘代多環芳烴可以與待測的多環芳烴部分分離。接在色譜后的質譜檢測器，可把這些質量數不同的氘代物檢出。由于氘代物在天然環境樣品中含量極微，替代物的回收率可視為目標物的回收率。
2.內標物、替代物與回收率的關系
目標物回收率的計算依靠內標物，內標物與替代物一樣，不應在樣品中出現，也不應是目標物。但對其的物理化學性質的要求不像替代物那么嚴，只要與目標物相近，在檢測器上能被定量檢測就行。例如，在分析多環芳烴時，內標物可以是氘代物，也可以是甲基或硝基苯類化合物。內標物在每個樣品預處理后，儀器分析前加入樣品中，同處理過的試樣一起走完儀器分析的全過程。內標物的作用是計算替代物的回收率，美國EPA標準方法中也用來作定量分析的依據。
回收率過高或過低說明操作過程有誤差，應該避免。替代物的回收率在40％至120％間，
分析誤差在要求的范圍內。這與傳統的加標回收率必須達到近100％的要求有很大差別。
傳統的定量分析一般是利用工作 曲線來進行的， 其間的內標物可校正儀器分析的誤差，對于預處理過程中誤差的校正無能為力，因此希望回收率接近100％。而采用替代物后，定量分析依靠替代物進行，利用回收率對數據進行校正 。
