什么是磷酸化
磷酸化是將磷酸基團加在中間代謝產物上或加在蛋白質（protein）上的過程。其中除去磷酸基團的酶稱為磷酸酶。 蛋白質磷酸化可發生在許多種類的氨基酸（蛋白質的主要單位）上，其中以絲氨/酸為多，接著是蘇氨/酸。
除了蛋白質以外，部分核苷酸，如三磷酸腺苷（ATP）或三磷酸鳥苷（GTP）的形成，也是經由二磷酸腺苷和二磷酸鳥苷的磷酸化而來，此過程稱為氧化磷酸化。另外在許多糖類的生化反應中（如糖解作用），也有一些步驟存在氧化磷酸化作用。
信號傳導中的作用：
（1）細胞內的信號蛋白主要分為兩大類：一類在蛋白激酶的作用下磷酸化，共價結合ATP所提供的磷酸基團；另一類則在信號作用下結合GTP，通常以GTP取代GDP。
（2）這兩種胞內信號蛋白的共同特征是，在信號達到時通過獲得一個或幾個磷酸基團而被激活，而在信號減弱時能去除這些基團，從而失去活性。在信號中繼網中，某個信號蛋白磷酸化通常造成下游的蛋白依次發生磷酸化，形成磷酸化級聯反應。
（3）蛋白質的磷酸化主要集中在肽鏈中的酪氨/酸、絲氨/酸、蘇氨/酸殘基上，這些殘基上具有游離的羥基，且本身不帶電荷，當磷酸化作用后，蛋白質便具有了電荷，從而使結構發生變化，進一步引起蛋白質活性的變化，這也是蛋白質磷酸化的意義所在。
磷酸化和非磷酸化的抗體主要區別有：
1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態（磷酸化）的蛋白。
2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設計，是一種位點特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達蛋白->純化->免疫動物->收獲抗體。
4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動物->收獲抗體。
5.磷酸化的蛋白很大部分是轉錄相關因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測同一個蛋白，原位檢測可能具有不同的細胞定位。轉錄因子磷酸化后由細胞質進入細胞核。
6.一般而言，磷酸化蛋白的實驗結果與分子功能更直接相關。
非磷酸化抗體是測該蛋白的含量，不能知道其活性狀態，磷酸化抗體是測該蛋白的磷酸化水平如何，側重于了解該蛋白的一種活性狀態。
磷酸化抗體主要是針對磷酸化位點制備的,檢測該蛋白在細胞受到刺激時該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強還是減弱)。
非磷酸化抗體(主要針對非磷酸化位點的肽段制備的)主要檢測組織或細胞中該蛋白的表達情況,組織分布或細胞中定位,同時可以作為磷酸化水平變化的內參等.
