如何確定一抗的稀釋比例？
點擊次數：768 更新時間：2023-01-11
如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進行實驗。但是由于標本類型、實驗條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗，從中發(fā)現最佳的稀釋比例。
如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Use at an assay dependent dilution"，就需要做大量的預實驗來摸索最佳的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實驗方法時常用的工作濃度，可以作為預實驗的參考。未純化的抗體一般在說明書中不會標明抗體的濃度，因為大部分全抗血清、培養(yǎng)上清或腹水形式的產品濃度都是沒有經過測定的。如果未純化抗體產品的說明書中沒有標明其中特異性抗體的濃度，實驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實驗稀釋比例。
請記住，下表中的各種稀釋比例和工作濃度僅僅是作為一個起始點，需要根據試驗結果來進行適當的調整。最好以此起點作一系列的濃度，從中確定最佳的工作濃度和稀釋比例！
組織培養(yǎng)上清 | 腹水 | 全抗血清 | 純化抗體 | |
WB / dot blot | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IHC / ICC | neat - 1/10 | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 5 ug/ml |
EIA / ELISA | 1/1000 | 1/10000 | 1/5000 | 0.1 ug/ml |
FC | 1/100 | 1/1000 | 1/500 | 1 ug/ml |
IP | 1/100 | 1/50-1/100 | 1 - 10 ug/ml | |
Concentration estimate | 1 - 3 mg/ml | 5 - 10 mg/ml | 1 - 10 mg/ml |
