大腸桿菌作為外源基因表達(dá)的宿主,遺傳背景清楚,技術(shù)操作簡(jiǎn)單,培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟(jì),倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應(yīng)用蕞廣泛,最成功的表達(dá)體系,常做高效表達(dá)的shou選體系。
真核基因在大腸桿菌中表達(dá),必須有合適的表達(dá)載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統(tǒng)
目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的情況:
大腸桿菌更適合原核基因的表達(dá),外源基因表達(dá)產(chǎn)量與單位體積產(chǎn)量是正相相關(guān)的,而單位體積產(chǎn)量與細(xì)胞濃度和每個(gè)細(xì)胞平均表達(dá)產(chǎn)量呈正相相關(guān).細(xì)胞濃度與生長(zhǎng)速率,外源基因拷貝數(shù)和表達(dá) 產(chǎn)物產(chǎn)量之間存在動(dòng)態(tài)平衡,單個(gè)細(xì)胞的產(chǎn)量又與外源基因拷貝數(shù),基因表達(dá)效率,表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性和細(xì)胞代謝負(fù)荷等因素有關(guān)。
大腸桿菌的生化特性簡(jiǎn)介
大腸桿菌的生化代謝非常活躍。大腸桿菌可以發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，個(gè)別菌株不產(chǎn)氣，大腸桿菌還能發(fā)酵多種碳水化合物，也可以利用多種有機(jī)酸鹽。大腸桿菌在常用的生化特性檢測(cè)項(xiàng)目中，甲基紅試驗(yàn)呈陽(yáng)性，吲哚產(chǎn)生和乳糖發(fā)酵是陽(yáng)性（個(gè)別菌株表現(xiàn)陰性），維-培試驗(yàn)是陰性，尿素酶和檸檬酸鹽利用呈陰性（極個(gè)別菌株表現(xiàn)陽(yáng)性），硝酸鹽還原試驗(yàn)表現(xiàn)陽(yáng)性，氧化酶表現(xiàn)陰性，氧化-發(fā)酵試驗(yàn)表現(xiàn)為F型。
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