質(zhì)粒克隆載體的設(shè)計(jì)和構(gòu)建的原則說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù)：965 更新時(shí)間：2023-06-01
①選擇合適的出發(fā)質(zhì)粒
出發(fā)質(zhì)粒也叫親本質(zhì)粒，它應(yīng)含有質(zhì)粒克隆載體bi備的元件，如復(fù)制起始位點(diǎn)、選擇標(biāo)記基因、克隆位點(diǎn)、啟動(dòng)子和終止子等。
②正確獲得構(gòu)建質(zhì)粒克隆載體的元件
一般采用限制性核酸內(nèi)切酶切割出質(zhì)粒DNA分子，獲得含有某種元件的DNA片段，還可以采用PCR技術(shù)從靶DNA中擴(kuò)增出含某種元件的特異性DNA片段。
③組裝合適的選擇標(biāo)記基因
構(gòu)建的質(zhì)粒克隆載體應(yīng)該組裝什么樣的選擇標(biāo)記基因，必須根據(jù)要轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞的特性來(lái)決定。
④選擇合適的啟動(dòng)子
為了構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的克隆載體，必須組裝合適的啟動(dòng)子，當(dāng)設(shè)計(jì)真核生物的基因須在原核生物中表達(dá)式，常改用原核生物或病毒(噬菌體)基因的啟動(dòng)子，而原核生物基因在真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，仍可用原核生物基因的啟動(dòng)子。
