紫外吸收法定量蛋白質(zhì)的優(yōu)缺點介紹
點擊次數(shù)：1015 更新時間：2024-01-05
1．蛋白質(zhì)測定的Folin-酚比色法（即Lowry法）的定量范圍為5～100μg蛋白質(zhì)，靈敏度高；但操作要費較長時間，且Folin試劑顯色反應由酪an酸、色an酸和半胱氨氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用；不同蛋白質(zhì)因酪an酸、色an酸含量不同而使顯色強度也稍有不同。 紫外吸收法測蛋白質(zhì)含量迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，已在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中廣泛采用，尤其在柱層析分離純化中，常用280nm進行紫外檢測，來判斷蛋白質(zhì)吸附或洗脫情況。
但該法的缺點是：
（1）對于測定那些與標準蛋白質(zhì)中酪an氨酸和色an酸含量差異較大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。故該法適于測定與標準蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。
（2）若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物質(zhì)，會出現(xiàn)較大干擾。例如，在制備酶的過程中，層析柱的流出液中有時混雜有核酸，應予以校正
2．當樣品中含有核酸類雜質(zhì)，可以根據(jù)核酸在260nm波長處有最qiang的紫外光吸收，而蛋白質(zhì)在280nm處有最大的紫外光吸收的性質(zhì)，通過計算可以適當校正核酸對于測定蛋白質(zhì)濃度的干擾作用。但是，因為不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測定結(jié)果還存在著一定的誤差
