培養(yǎng)基傾注溫度小常識(shí)
1、培養(yǎng)基的傾注適宜溫度約45℃。培養(yǎng)基放置于手心感覺(jué)不燙，但是放置于手背感覺(jué)燙時(shí)，培養(yǎng)基溫度大約就是45℃。培養(yǎng)基傾注時(shí)溫度太高的話，凝固時(shí)間較長(zhǎng)，另外皿蓋上會(huì)有大量冷凝水，不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。溫度太低則容易出現(xiàn)倒板過(guò)程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固的現(xiàn)象。
2、有些培養(yǎng)基需要加入添加成分，這些添加成分在加入前應(yīng)先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。
3、目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基滅菌后會(huì)放置水浴或者烘箱中，需使用的時(shí)候拿出來(lái)直接倒板。但培養(yǎng)基靜置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，靜置時(shí)間一般不超過(guò)4小時(shí)。靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，培養(yǎng)基中瓊脂可能會(huì)少量凝固，形成類(lèi)似絮狀析出。
4、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不可避免因特殊情況而導(dǎo)致未倒板培養(yǎng)基已凝固，凝固后培養(yǎng)基可重新加熱溶解。一般來(lái)說(shuō)沸水浴或者電磁爐加熱，不能重新再滅一次菌。
培養(yǎng)基的傾倒方法主要涉及以下幾個(gè)步驟：
1.溫度調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基傾注的適宜溫度大約為45℃。如果溫度過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致凝固時(shí)間延長(zhǎng)，且皿蓋上會(huì)有大量冷凝水，不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果溫度過(guò)低，則可能導(dǎo)致倒板過(guò)程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固。
2.添加成分。如果培養(yǎng)基需要加入添加成分，這些成分在加入前應(yīng)先放置到室溫，以避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。
3.靜置時(shí)間。培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)放置在水浴或烘箱中，使用前拿出直接倒板。培養(yǎng)基的靜置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般不超過(guò)4小時(shí)，以避免瓊脂少量凝固。
4.平板準(zhǔn)備。倒皿前，平皿應(yīng)保持在35℃~40℃的溫度。如果需要表面接種，有冷凝水的平板表面容易產(chǎn)生蔓延菌落。這時(shí)可放在有對(duì)流的無(wú)菌凈化臺(tái)中吹干培養(yǎng)基表面，但不能過(guò)度干燥，否則培養(yǎng)過(guò)程中平板容易開(kāi)裂。
5.傾注量。平板傾注量一般在18~20mL左右，如果培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)48小時(shí)或培養(yǎng)溫度高于40℃，為防止水分過(guò)量蒸發(fā)導(dǎo)致平板開(kāi)裂，傾注量一般為25mL左右。
6.避免氣泡。倒平板時(shí)盡量貼著平皿壁緩慢倒入，將氣泡留在瓶子底部。如果平板中有少量氣泡的話，可以把氣泡輕搖到平板壁上，這樣不會(huì)影響結(jié)果觀察。
7.混合均勻。每個(gè)平板中加入10mL融化的瓊脂培養(yǎng)基并迅速往復(fù)搖動(dòng)和轉(zhuǎn)圈晃動(dòng)5~15次使培養(yǎng)基與接種物充分混合。
8.培養(yǎng)。待平板冷卻后翻轉(zhuǎn)并置于適當(dāng)?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)。
在整個(gè)操作過(guò)程中，需要注意避免污染，使用前需將裝有培養(yǎng)基的瓶子或試管弄松，然后放在滾水或蒸汽浴里進(jìn)行溶解，要小心避免培養(yǎng)基過(guò)熱變質(zhì)。已消毒培養(yǎng)皿的數(shù)量要比所測(cè)樣品的數(shù)量多一個(gè)做空白對(duì)照。
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