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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    戊二醛固定劑的功能及作用特點
    點擊次數:88 更新時間:2025-04-24

    戊2醛是一種五碳醛,含有兩個醛基。分子式為$C_5H_8O_2$,分子量為100。電鏡固定通常用市售的25%的戊2醛水溶液稀釋成需要的濃度。其pH為4.0$sim$5.0。氧氣、高溫、中性或堿性pH均能使戊2醛發生聚合失去醛基,并降低交聯效力,所以平時這種原液應保存在低溫處。此外戊2醛存放時間過長時,pH值會降低,顏色變黃,固定效力也大大降低,若戊2醛pH值降至3.5以下或含有其它雜質時,必須純化后才能使用。戊2醛對皮膚有硬化作用,但它的揮發性較甲醛弱,最好能在通風櫥中操作。


    基底膜六胺銀染色液(PASM).jpg

    戊2醛作為固定劑有如下特點:

    它的反應速度快,是優良的前固定劑。但它的滲透速度較慢,必要時配合甲醛使用效果更佳。

    它是蛋白質的強固定劑。它能快速而不可逆地與氨基反應,和甲醛相似,戊2醛的一個醛基與氨基反應,脫水后生成不穩定的Schiff鍵化合物。

    由于戊2醛有兩個醛基,它可以通過與相鄰的另一氨基反應,而產生交聯作用。戊2醛的兩個醛基也可能與同一氨基作用,形成環狀結構

    這種環狀結構可以進一步與另一戊2醛反應,生成丁間醇c醛冷凝物(Aldol condensate)。這種化合物與氧分子共同作用,生成穩定的嘧啶類衍生物(Pyridine derivatives),并在此過程中發生交聯。

    固定劑與甲醛不同,戊2醛的這一步反應是不可逆的,而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內部氧氣供應不足,戊2醛在大塊樣品的內部無法形成穩定的生成物,會導致樣品內部的固定效果不佳。因而在使用戊2醛固定時,小塊的樣品固定效果較為理想。戊2醛通過交聯作用固定蛋白質的過程會伴隨氫離子的釋放,使樣品pH值降低。為了維持pH值穩定在最佳水平,在戊2醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。

    戊2醛能通過固定核蛋白來固定組織和細胞中的DNA和RNA,能保存糖原,也可以固定和蛋白質有關聯的或含有氨基和亞氨基的脂類。但是只使用戊2醛固定的樣品無法阻止后面的脫水、滲透和包埋過程對樣品脂類的抽提,因而對細胞膜的固定效果不理想。

    戊2醛在固定過程中并不wan全破壞細胞膜的半透膜特性,因而需要選擇合適的固定液滲透壓,以免造成固定假象。但合適的固定液滲透壓隨被固定細胞和緩沖液的種類改變,很難找到一個通用的滲透壓。在實際操作中,$1.0%-2.5%$戊2醛(使用0.1M磷酸鹽緩沖液或0.1M二甲胂s酸鹽緩沖液)在一般情況下,已經能提供理想的固定效果。除非觀察到明顯的滲透壓造成的假象,一般不對固定液專門進行滲透壓調節。

    用戊2醛前固定的樣品不易變脆,可以進行長時間固定(但最好不要超過一個星期),因而適用于遠離實驗室或野外現場取材。但戊2醛在稀釋溶液中會自行發生一系列反應,因而固定液應盡可能新鮮配制中。

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