在細胞培養(yǎng)過程中，真正困擾研究人員的是繁瑣的胰蛋白酶凍融流程：解凍儲存的胰蛋白酶、分裝成單次使用量、凍存分裝試劑、亞培養(yǎng)時再次解凍，這意味著科學家zui需要的是在冰箱外能保持穩(wěn)定、在廣泛的實驗室溫度條件下仍具有活性的胰蛋白酶配方。
對科學家而言不僅是工具：論胰蛋白酶在實驗室的重要性
生理學家認為，胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶是存在于消化液中穩(wěn)定、關鍵的蛋白消化酶。zui早關于胰蛋白酶的描述是在19世紀末期，胰蛋白酶zui初作為胰蛋白酶原形成于胰腺，然后通過胰腺管到達十二指腸并剪切為活性形式。酶活性的封存可防止體蛋白的無選擇、不合需求的剪切，避免引起炎癥疾病如胰腺炎。
具有貼壁表型的細胞培養(yǎng)物
胰蛋白酶是一個有力的特異分子工具，在生命科學家的手中實現精確的蛋白剪切。關于胰蛋白酶在細胞培養(yǎng)中的應用報告zui早出現于50多年以前。在細胞培養(yǎng)中，與胰蛋白酶短期孵育可以剪切蛋白，將貼壁培養(yǎng)細胞從培養(yǎng)平面和其他細胞上解離下來，從而將細胞從培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板上移除，構建單細胞懸液用于細胞計數、細胞傳代和其他下游實驗。
特定應用的胰蛋白酶：請更穩(wěn)定一些
除了細胞培養(yǎng),胰蛋白酶在生命科學領域還有很多其他用途。比如在蛋白質組學實驗中，胰蛋白酶可將蛋白消化成多肽用于質譜分析。在此應用中，胰蛋白酶的特異性尤其有用，因為它斷裂只是羧基在精氨酸或賴氨酸殘基上的肽鍵。
然而，胰蛋白酶消化蛋白的異常活性有時也會給蛋白質組學研究帶來一些問題。如果不采取穩(wěn)定措施，胰蛋白酶zui終會進行自我消化，這是大家zui不希望看到的，因為自我裂解可能污染和混淆實驗結果。
細胞培養(yǎng)新福利：一款適用于常規(guī)解離的熱穩(wěn)定配方
要為細胞培養(yǎng)應用開發(fā)不自我剪切的熱穩(wěn)定性胰蛋白酶非常容易，為什么要為常規(guī)的細胞培養(yǎng)應用開發(fā)一款不同的穩(wěn)定胰蛋白酶配方呢？在蛋白質組學研究中，避免使用可能污染質譜結果的添加劑來穩(wěn)定胰蛋白酶是非常必要的，但對細胞培養(yǎng)來說，其面臨的問題是不同的。但細胞培養(yǎng)過程中，真正困擾研究人員的是繁瑣的胰蛋白酶凍融流程：解凍儲存的胰蛋白酶、分裝成單次使用量、凍存分裝試劑、亞培養(yǎng)時再次解凍，這意味著科學家zui需要的是在冰箱外能保持穩(wěn)定、在廣泛的實驗室溫度條件下仍具有活性的胰蛋白酶配方。
新配方胰蛋白酶不僅在4°C條件下穩(wěn)定，而且在室溫條件下也是穩(wěn)定的，甚至在37°C條件下仍能保持>90%的活性。StableCell?胰蛋白酶有3個不同的濃度(1x、5x和10x)，可根據不同的細胞粘附強度進行優(yōu)化。而且與其他室溫解離試劑不同，這個新配方仍是豬胰腺胰蛋白酶，不需要在之前使用傳統(tǒng)胰蛋白酶配方的培養(yǎng)系統(tǒng)中再次進行驗證。
讓你的應用成為你的指南：為什么胰蛋白酶的配方不盡相同？
許多實驗室可能不管其應用是什么，都直接購買zui常用的胰蛋白酶配方：0.25%胰蛋白酶+EDTA，再加入酚紅作為pH指示劑。盡管不是典型的解離大部分貼壁細胞的強大試劑，但當EDTA加入胰蛋白酶后提供了一種解離細胞的協(xié)同機制：EDTA結合移除細胞-表面以及細胞-細胞間的鈣，螯合培養(yǎng)基中抑制胰蛋白酶活性的游離Ca2+，從而降低胰蛋白酶的使用濃度，避免高濃度胰蛋白酶或過度孵育對細胞的傷害。胰蛋白酶在pH 7-9 范圍內具有*活性，因此配方中通常使用酚紅作為pH指示劑。然而，有些特殊應用則需要選擇不含EDTA或酚紅的配方。
選擇和使用技巧：生命科學應用的胰蛋白酶配方
為實現*的細胞解離效果，下述技巧可幫助選擇正確的胰蛋白酶配方：
對于存在較高自身消化片段和污染物峰風險的蛋白質組學研究，通過分子改進（如重組配方）方法實現穩(wěn)定的胰蛋白酶是*選擇。
在常規(guī)細胞培養(yǎng)應用中使用熱穩(wěn)定性胰蛋白酶配方可避免繁瑣的凍融分裝流程，避免出現丟棄不小心落在冰箱外的標準胰蛋白酶而產生的浪費。
標準和熱穩(wěn)定性胰蛋白酶配方通常都具有不同的胰蛋白酶濃度，使用為你的細胞推薦的zui低有效濃度。
