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    抗體的制備方法與原理
    點(diǎn)擊次數(shù):706 更新時(shí)間:2020-12-23

    抗血清的制備

    有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強(qiáng)和效價(jià)高)的抗體。

    (一)用于免疫的動(dòng)物

    作免疫用的動(dòng)物有哺乳類(lèi)和禽類(lèi),主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實(shí)驗(yàn)室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動(dòng)物種類(lèi)的選擇主要根據(jù)抗原的生物學(xué)特性和所要獲得抗血清數(shù)量,如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因動(dòng)物反應(yīng)良好,而且能夠提供足夠數(shù)量的血清,用于免疫的動(dòng)物應(yīng)適齡,健壯,無(wú)感染性疾患,-好為///雄性,此外還需十分注意動(dòng)物的飼養(yǎng),以消除動(dòng)物的個(gè)體差異以及在免疫過(guò)程中死亡的影響。若用兔,-好用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。

    (二)免疫途徑

    免疫途徑有多種多樣,如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、淋巴結(jié)內(nèi)注射等,一般常用皮下或背部多點(diǎn)皮內(nèi)注射,每點(diǎn)注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學(xué)活性抗原,一般不宜采用靜脈注射。

    (三)佐劑

    由于不同個(gè)體對(duì)同一抗原的反應(yīng)性不同,而且不同抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力也有強(qiáng)有弱,因此常常在注射抗原的同時(shí),加入能增強(qiáng)抗原的抗原性物質(zhì),以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng),這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。

    佐劑除了延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的存留時(shí)間,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),使參與免疫反應(yīng)的免疫活性細(xì)胞增多,促進(jìn)T細(xì)胞與B細(xì)胞的相互作用,從而增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的細(xì)胞免疫和抗體的產(chǎn)生。

    常用的佐劑是福氏佐劑(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份,羊毛脂與石臘油的比例,視需要可調(diào)整為1:2~9(V/V),這是不*福氏佐劑,在每毫升不*佐劑加入1~20mg卡介苗就成為*佐劑。

    配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆谩C庖咔叭〉热莘e*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼續(xù)研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內(nèi)*不擴(kuò)散為止。為避免損失抗原,亦可用一注射器裝抗原液,另一注射器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管連接,然后二者來(lái)回反復(fù)抽吸,約數(shù)十分鐘后即能*乳化。檢查合格后即以其中一注射器作注射用。

    (四)免疫方法

    抗原劑量,*劑量為300~500μg,加強(qiáng)免疫的劑量約為*劑量為1/4左右。每2~3周加強(qiáng)免疫一次。加強(qiáng)免疫時(shí)用不*佐劑,*免疫時(shí)皮下注射百日咳疫苗0.5ml,加強(qiáng)免疫時(shí)不必注射百日咳疫苗。

    在第2次加強(qiáng)免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢測(cè)抗體效價(jià)(見(jiàn)后)。如未達(dá)到預(yù)期效價(jià),需再進(jìn)行加強(qiáng)免疫,直到滿意時(shí)為止(圖2-3)。當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到預(yù)期水平時(shí),即可放血制備抗血清。

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