如何選擇western-blot中分離膠的濃度
點擊次數：432 更新時間：2022-09-26
western blot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量 不同的分離膠濃度對不同的目的蛋白分子量的分辨率不一樣，比如15%的分離膠更適合45kDa的分目的蛋白，而10%的分離膠更適合70kDa的目的蛋白而因為western blot的膜應該是*覆蓋SDS PAGE的凝膠，所以不用太擔心條帶在凝膠上位置偏上活偏下 所以western blot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量
如果以溴酚藍跑到膠的底部為準,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大約1/2（不太確定）的地方,對于分子量比較小的蛋白,當然是膠的濃度越大,分離效果越好.但是你必須考慮到,膠的孔徑一旦小于蛋白-SDS復合體的直徑,分子量大于這個蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分離效果.如果孔徑太大,所有蛋白都跑得那么快,也是分不開的.
所以,關鍵是看這個分子量附近的蛋白,比如±5kD以內的所有蛋白,在不同濃度的膠中的速度差要盡可能達到最大,假設是對數正態分布,那么方差要足夠大,才會有較好的分離效果.另一方面,蛋白跑的路程越大,也越能和附近的蛋白分開.
建議：溴酚藍跑到底,而目標蛋白正好在整塊膠的1/2的地方,分離的效果時最/好的。
