什么是引物？如何溶解和保存引物？
點擊次數：679 更新時間：2022-10-11
什么是引物？
引物（primer），是一小段單鏈DNA或RNA，作為DNA復制的起始點，在核酸合成反應時，作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈，在引物的3′-OH上，核苷酸以二酯鏈形式進行合成，因此引物的3′-OH，必須是游離的。
如何溶解引物？
干燥后的引物質地非常疏松，開蓋前最好瞬時離心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據計算出的體積加入去離子無菌水或TE(pH8.0)緩沖液，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因為有些蒸餾水的pH值比較低（pH4-5）,引物在這種條件下不穩定。
如何保存引物？
引物合成后，經過一系列處理和純化步驟，旋轉干燥而成無色或白色絮狀干粉。
干 粉：運輸時常溫運輸，-20℃可以保存一年。
儲存液：配好后分裝成幾管，避免反復凍融，-20℃可以保存半年。
工作液：常規使用，4℃保存，也可-20℃保存，但應避免反復凍融。
修飾熒光引物：需要避光保存，盡快使用為宜。
引物設計的基本原則：
1、引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。
2、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。
3、引物內部不應出現互補序列。
4、兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。
5、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續8個堿基在待擴增區以外不能有*互補序列。
