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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    牛血清蛋白的測定方法以及用途
    點擊次數:679 更新時間:2022-11-21

    牛血清白蛋白的相對分子質量為10的4次方這個級別,它不是一定的,而是多聚物的,有的地方測試牛血清白蛋白分子式數據為70 000,這一數據是在做PCR的時候使用的數據。

    牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨/酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質含量的標準曲線用。

    一般買回來的牛血清蛋白是細小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。

    牛血清白蛋白.jpg

    用途
    1、特純級牛血清蛋白
    用途:用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑,生化試驗等。
    電場対超感牛血清白蛋白截留率的影響
    性狀:淡黃色干燥粉末

    2、無脂肪酸牛血清蛋白
    用途:用作酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適用于容易受脂肪酸影響的產品和試驗。
    性狀:淡黃色干燥粉末

    3、無蛋白酶牛血清蛋白
    用途:用于酶標、金標等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適合血液脂類的診斷試驗、脂類診斷試劑及對純度要求高的產品。
    性狀:淡黃色干燥粉末

    4、細胞培養級牛血清蛋白
    用途:無血清培養基的蛋白添加劑,供細胞培養使用。
    性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白

    測定
    標準曲線
    一般用分光光度法測物質的含量,先要制作標準曲線,然后根據標準曲線查出所測物質的含量。因此,制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術  。

    測定方法
    1. 凱氏定氮法
    2. 雙縮脲法
    3. Folin-酚試劑法
    4. 紫外吸收法
    5. 考馬斯亮藍法

    試劑
    1. 考馬斯亮藍試劑:
    考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。zui終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
    2. 標準蛋白質溶液:
    純的牛血清血蛋白,預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

    器材
    1. 722S型分光光度計使用及原理。
    2. 移液管使用。

    制作步驟
    試管編號 0 1 2 3 4 5 6
    100ug/ml標準蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
    0.15mol/L NaCl (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
    考馬斯亮藍試劑 (ml) 5 5 5 5 5 5 5
    搖勻,1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色

    3、以A595nm為縱坐標,標準蛋白含量為橫坐標(六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標軸上繪制標準曲線。
    (1)、利用標準曲線查出回歸方程。
    (2)、用公式計算回歸方程。
    (3)、或用origin作圖 ,測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
    一般相關系數應過0.999以上,至少2個9以上。
    (4)、繪圖時近兩使點在一條直線上,在直線上的點應該在直線兩側。

    含量的測定
    樣品即所測蛋白質含量樣品(含量應處理在所測范圍內),依照操作步驟1操作,測出樣品的A595nm,然后利用標準曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。
    一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測A595nm值,然后再計算。

    注意事項
    1. 玻璃儀器要洗滌干凈。
    2. 取量要準確。
    3. 玻璃儀器要干燥,避免溫度變化。
    4. 對照:用被測物質以外的物質作空白對照

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