微生物侵入法，又稱微生物挑戰法，是一種較為常見的密封完整性測試方法，通常與模擬灌裝同時進行。通過按照模擬灌裝驗證方案進行培養基模擬灌裝，然后進行壓塞軋蓋后，目檢合格，經已驗證的滅菌柜滅菌后，將容器密封面浸入到高濃度的菌液中，使樣品容器內的培養基充分接觸封口內表面，樣品的頸部及封口的外表面應完/全浸泡在菌懸液中，浸泡一定時間后取出，定期培養后檢查是否有微生物侵入，以確定容器密封系統的完整性。同時，需要做陽性對照試驗，確認培養基的促生長能力。
一、微生物侵入法試驗方法
將新鮮的銅綠假單胞菌（Pswudomonas aeruginosa）ATCC9027的菌懸液倒入不銹鋼桶中。
1、將50個經滅菌的試樣編號，完/全侵入菌懸液中，同時將袋平放，使袋內的無菌培養基充分接觸焊接部位的內表面，試樣容器在菌懸液中持續浸泡4小時。
2、浸泡結束時再取一份菌懸液，用平板計數菌懸液的濃度。
3、從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒容器外表面。
4、取裝滿培養基樣品兩個，作陽性對照，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒，接種入10～100CFU銅綠假單胞菌，按步驟8.2進行培養基的營養試驗。
5、將挑戰試驗用的試樣培養7天，觀察檢查試樣容器內培養基中微生物的生長情況。有生長記作+，無生長記作-。如果試樣容器長菌，按8.2方法確認生長菌是挑戰微生物——銅綠假單胞菌；如果所有試樣容器都不長菌，則取10個試樣按8.2進行培養基的營養性試驗。
6、試驗結束后，挑戰試驗用菌懸液經121℃30分鐘滅菌后丟棄。
二、微生物侵入法判斷標準
1、步驟2、步驟4、5中進行的營養性試驗都合格，試樣的挑戰試驗才有效。
2、在挑戰試驗開始時，挑戰用菌懸液濃度（活菌數）必須達到1×106CFU/ml。
3、挑戰試驗中如長菌，需記錄長菌的試樣數，并按下述要求作進一步調查。
4、仔細檢查容器各部位封口處是否有缺損，造成微生物浸入。
5、將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照詳細記錄。
6、如果任何挑戰試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，試驗作失敗論處。
