穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建與傳代步驟
點擊次數(shù)：872 更新時間：2023-01-31
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建方法：
慢病毒載體包裝慢病毒后感染Hela細胞，用嘌呤霉索篩選得到EGFP過表達多克隆細胞株。收到細胞的處理：根據(jù)客戶所在地及發(fā)貨季節(jié)，我們可能采用干冰運輸?shù)膬龃婕毎蛘叱剡\輸?shù)呐囵B(yǎng)瓶細胞兩種不同形式發(fā)貨。收到細胞后根據(jù)細胞運輸類型采用下面兩種方式操作。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株傳代方式:
1、傳代前將細胞培養(yǎng)液、PBS和yi蛋白酶溫浴到37C。
2、吸去細胞培養(yǎng)液。用PBS漂洗--次。
3、加入適量yi蛋白酶，輕輕晃動細胞瓶，使yi蛋白酶均勻覆蓋細胞。吸去yi蛋白酶，將培養(yǎng)瓶放置在細胞培養(yǎng)箱中，37攝氏度消化。在倒置顯微鏡下觀察，看到細胞分開及稍微變圓即可，過度消化可能導(dǎo)致細胞貼壁困難。
4、加入5ml細胞培養(yǎng)基，用吸管輕柔吹打分散細胞。按1:3到1:5接種細胞。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株凍存方法;
1、將細胞培養(yǎng)液、PBS和yi蛋白酶和凍存液溫浴到37C。
2、凍存的細胞應(yīng)為狀態(tài)好，生長旺盛的細胞。按細胞傳代方法消化細胞，用適量細胞培養(yǎng)液終止消化，重懸細胞。
3、室溫200g離心10分鐘收集細胞，用凍存液重懸細胞，并調(diào)節(jié)濃度至大約1X10^6個細胞/ml。分裝到細胞凍存管。
4、將細胞凍存管放入程序降溫盒，-80C過夜。將凍存的細胞轉(zhuǎn)入液氮中。
