蛋白難以表達、表達產(chǎn)量低、蛋白折疊或者修飾不正確等問題，一直是大家的心頭痛。一般會通過增加可溶性標(biāo)簽、 重新構(gòu)建載體或者更換表達系統(tǒng)來解決。
但高昂的費用及過長的表達時間也讓蛋白表達成了科研路上一座無法跨越的大山。在此遠慕為大家推薦一款無細胞蛋白表達系統(tǒng)，它廣泛適用于多物種；不需要培養(yǎng)細胞，配好體系就能表達蛋白；對于一些困難蛋白也很有效！
Cell-Free System（CFS）
無細胞蛋白表達系統(tǒng)
CFS 利用麥胚提取物，人工提供蛋白表達所需的酶、輔助因子，并模擬表達環(huán)境，僅使用 PCR 片段或載體為模板，即可在反應(yīng)體系中通過雙層液相反應(yīng)法( Bilayer Reaction Method ) 進行蛋白表達。
廣泛適應(yīng)
這是一個可以表達多種物種（包括真核生物、原核生物和病毒）蛋白的系統(tǒng)。
快捷簡便
即使你以前從未表達過蛋白，也很容易上手。整個過程僅需 四步，省去培養(yǎng)細胞的麻煩，節(jié)約大量時間。
成功構(gòu)建模板DNA后，只需一支移液器和一個培養(yǎng)箱，進行簡單的配液操作，就能在兩天后獲得目的蛋白。
高產(chǎn)高質(zhì)
這是一種強大的蛋白合成技術(shù)，那些難以加工的蛋白, 它都可以表達：
毒蛋白/受細胞環(huán)境影響的蛋白；
共表達蛋白/高通量表達蛋白；
膜蛋白/轉(zhuǎn)錄因子（可通過添加輔助因子、金屬離子、添加劑等提高蛋白活性）。
CFS 系統(tǒng)比其他蛋白表達系統(tǒng)
具有 更高的表達率和溶解度
CFS 蛋白表達系統(tǒng)與其他表達系統(tǒng)對比
通過 CFS 系統(tǒng)可以獲得 更高產(chǎn)量
CFS 蛋白表達系統(tǒng)產(chǎn)量與其他表達系統(tǒng)對比
相比于傳統(tǒng)蛋白表達系統(tǒng)，CFS 無細胞蛋白表達系統(tǒng)，在各個方面均表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢，為蛋白表達研究的高效進行，提供了可能。
含二硫鍵蛋白的合成
二硫鍵在分泌蛋白和膜蛋白的細胞外結(jié)構(gòu)域的形成中起重要作用，它們對蛋白的功能表達至關(guān)重要。 在真核生物中，多肽合成發(fā)生在細胞質(zhì)的還原環(huán)境中，而二硫鍵則在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）的氧化環(huán)境中形成。但是 CFS 中的蛋白合成通常在還原條件下進行，因此 在CFS 中引入了參與真核生物二硫鍵形成的酶——蛋白二硫鍵異構(gòu)酶 ( PDI ) 和 ER 氧化還原酶 1α (Ero1α)。
使用CFS系統(tǒng)合成了抗 AGIA-IgG（兔）的 Fab 片段。Fab 片段除了有三個重 (H) 鏈和三個輕 (L) 鏈中的二硫鍵外，還包含重鏈和輕 (H-L) 鏈之間的二硫鍵。此外，幾個脯an酸殘基以順式形式形成肽鍵。圖中是兔 IgG-Rab 片段結(jié)構(gòu)和二硫鍵位置。
使用 CFS 系統(tǒng)合成了與溶栓有關(guān)的組織纖溶酶原激活劑 ( tPA ) 的蛋白酶結(jié)構(gòu)域（氨基酸殘基 297；六個二硫鍵）。當(dāng)使用不含 DTT 的底物時蛋白溶解度增加了 380%。
病毒酶蛋白的合成與活性測定
為了開發(fā)抗病毒感染的新藥，了解病毒生長和毒力的機制非常重要。病毒編碼的酶常用于靶向治療。然而， 由于不溶性，使用傳統(tǒng)的大腸桿菌或昆蟲細胞系統(tǒng)提取有活性蛋白可能很困難。使用 CFS 可以在體外合成逆轉(zhuǎn)錄酶和 HIV-1 整合酶蛋白。
應(yīng)用于蛋白復(fù)合物合成
CFS 有 共表達能力，細胞內(nèi)信號調(diào)節(jié)因子 SOCS1 的表達被認為是在 HIV 感染細胞中誘導(dǎo)的，對艾滋病的研究有重要的意義。除此之外 CFS 還可以 高通量制備 E3 連接酶。
CFS 合成了包括 SOCS1 在內(nèi)的四種蛋白組成的泛素連接酶復(fù)合物（E3 復(fù)合物）。
