BCA法測(cè)蛋白濃度時(shí),樣品不溶解時(shí)按照以下方法解決操作。
BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測(cè)定方法，其測(cè)定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更*的專用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。
BCA 蛋白定量測(cè)定方法：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10 微升；取10 微升待測(cè)樣品加入96 孔板。每個(gè)測(cè)定要做2-3 個(gè)平行。
3、向帶測(cè)樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標(biāo)儀562nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。
6、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品濃度。
BCA 蛋白定量測(cè)定操作注意事項(xiàng)：
1、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外，還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品的濃度較高（>50μg/ml），反應(yīng)溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低（<50μg），反應(yīng)的溫度為60℃，該溫度下，色an酸、酪an酸和肽鍵得到充分氧化，大大提高檢測(cè)靈敏度。
2、該方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml；當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時(shí)，推薦60℃溫浴，并將蛋白液：工作液的比例調(diào)至1：8 進(jìn)行測(cè)定（增強(qiáng)法）可以檢測(cè)到5ug/ml。
試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存。
 |
 |
 |
