elisa檢測中顯色常見問題的解決
點擊次數：2377 更新時間：2014-07-24
elisa檢測中顯色常見問題的解決
所有檢測孔均無色
原因可能為酶結合物或底物失效、底物漏加（錯加）、陽性對照漏加或錯加，其中以酶結合物失效和底物錯加為常見。查找原因的方法是將酶結合物與底物直接混合，觀察有無顯色；如顯色則提示為陽性對照漏加或底物錯加所致；若不顯色，用新酶結合物與底物混合，觀察有無顯色；不顯色則提示底物失效，顯色提示原用酶結合物失效。在確定底物錯加或失效者，若來加終止液。可重新洗板再顯色。
所有檢測孔均顯色
原因多為洗板不凈（扎內殘留未結合的酶結合物）或顯色時間過長。洗板是elisa檢測重要環節．應嚴格按說明書進行，可以適當延長浸泡時間、增加洗滌次數ｌ～２次，否則極易導致假陽性（競爭抑制法為假陰性）結果。
質控孔無色
一般為酶結合物活性降低所致（排除底物錯加、失效及漏加質控物）。質控物一般為臨界值的，是確定試驗成功與否的重要依據。陽性對照雖然顯色，但可以發現其吸光度變化較大，該批試驗須重作，防止弱陽性結果的漏檢。
底物有顏色
目前國產elisa試劑盒的色原底物常為Ａ、B兩種液體，分別為一定濃度的雙氧水和四甲基聯苯胺（TMB）或鄰苯二胺（OPD）溶液，他們都不穩定，使用保存不當易產生顏色；在使用時發現有顏色（或各取一滴混合后顯色），說明他們變質或已受污染，必須丟棄。
試劑盒的貯藏應按說明書的要求，在elisa檢測中應嚴格按照elisa的操作規則執行，避免elisa檢測中的常見實驗問題。
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